Engineering the cytokinin-glucoside specificity of the maize beta-d-glucosidase Zm-p60.1 using site-directed random mutagenesis.

Kód výsledku v IS VaVaI

RIV/62156489:43210/12:00177633 - isvavai.cz

Nalezeny alternativní kódy

RIV/68081707:_____/12:00440809

Výsledek na webu

http://dx.doi.org/10.1016/j.phytochem.2011.10.008

DOI - Digital Object Identifier

10.1016/j.phytochem.2011.10.008

Jazyk výsledku

angličtina

Název v původním jazyce

Engineering the cytokinin-glucoside specificity of the maize beta-d-glucosidase Zm-p60.1 using site-directed random mutagenesis.

Popis výsledku v původním jazyce

The maize beta-d-glucosidase Zm-p60.1 releases active cytokinins from their storage/transport forms, and its over-expression in tobacco disrupts zeatin metabolism. The role of the active-site microenvironment in fine-tuning Zm-p60.1 substrate specificityhas been explored, particularly in the W373K mutant, using site-directed random mutagenesis to investigate the influence of amino acid changes around the 373 position. Two triple (P372T/W373K/M376L and P372S/W373K/M376L) and three double mutants (P372T/W373K, P372S/W373K and W373K/M376L) were prepared. Their catalytic parameters with two artificial substrates show tight interdependence between substrate catalysis and protein structure. P372T/W373K/M376L exhibited the most significant effect on naturalsubstrate specificity: the ratio of hydrolysis of cis-zeatin-O-beta-d-glucopyranoside versus the trans-zeatin-O-beta-d-glucopyranoside shifted from 1.3 in wild-type to 9.4 in favor of the cis- isomer. The P372T and M376L mutations in P372

Název v anglickém jazyce

Engineering the cytokinin-glucoside specificity of the maize beta-d-glucosidase Zm-p60.1 using site-directed random mutagenesis.

Popis výsledku anglicky

The maize beta-d-glucosidase Zm-p60.1 releases active cytokinins from their storage/transport forms, and its over-expression in tobacco disrupts zeatin metabolism. The role of the active-site microenvironment in fine-tuning Zm-p60.1 substrate specificityhas been explored, particularly in the W373K mutant, using site-directed random mutagenesis to investigate the influence of amino acid changes around the 373 position. Two triple (P372T/W373K/M376L and P372S/W373K/M376L) and three double mutants (P372T/W373K, P372S/W373K and W373K/M376L) were prepared. Their catalytic parameters with two artificial substrates show tight interdependence between substrate catalysis and protein structure. P372T/W373K/M376L exhibited the most significant effect on naturalsubstrate specificity: the ratio of hydrolysis of cis-zeatin-O-beta-d-glucopyranoside versus the trans-zeatin-O-beta-d-glucopyranoside shifted from 1.3 in wild-type to 9.4 in favor of the cis- isomer. The P372T and M376L mutations in P372

Druh

J_x - Nezařazeno - Článek v odborném periodiku (Jimp, Jsc a Jost)

CEP obor

CE - Biochemie

OECD FORD obor

—

Projekt

Výsledek vznikl pri realizaci vícero projektů. Více informací v záložce Projekty.

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Rok uplatnění

2012

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Název periodika

Phytochemistry

ISSN

0031-9422

e-ISSN

—

Svazek periodika

74

Číslo periodika v rámci svazku

2

Stát vydavatele periodika

GB - Spojené království Velké Británie a Severního Irska

Počet stran výsledku

9

Strana od-do

40-48

Kód UT WoS článku

300815700004

EID výsledku v databázi Scopus

—