Příprava, izolace a částečná charakterizace rekombinantních proteinů ?-glukosidasy ZM-P60.1

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F62156489%3A43210%2F12%3A43907637" target="_blank" >RIV/62156489:43210/12:43907637 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

<a href="https://mnet.mendelu.cz/mendelnet2012/mnet_2012_full.pdf" target="_blank" >https://mnet.mendelu.cz/mendelnet2012/mnet_2012_full.pdf</a>

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

Příprava, izolace a částečná charakterizace rekombinantních proteinů ?-glukosidasy ZM-P60.1

Popis výsledku v původním jazyce

Cílem této práce byla exprese, purifikace a částečná charakterizace rekombinantních mutant SB1 a SB2 kukuřičné ?-glukosidasy Zm-p60.1. Praktická část práce je zaměřena na produkci, purifikaci a enzymovou kinetiku mutant SB1 a SB2 kukuřičné ?-glukosidasyZm-p60.1. Exprese proteinů probíhala v bakteriích Escherichia coli BL21(DE3)pLysS-T1R. Částečná purifikace byla realizována afinitní chromatografií za použití kolony HisTrap HP (5 ml). Vysoké homogenity proteinů (> 95 %) bylo docíleno purifikací gelovoufiltrací na koloně HiLoad 16/60 Superdex 200 prep grade. U mutantů SB1 a SB2 nebyl zaznamenán téměř žádný rozpad dimeru na monomerní jednotky enzymu. Lze proto očekávat, že zavedené mutace nemají výraznější vliv na stabilitu kvarterní struktury enzymu.

Název v anglickém jazyce

Preparing, isolation and partical characterization of recombinant proteins ?-glucosidase Zm-p60.1

Popis výsledku anglicky

The maize beta-glucosidase (EC 3.2.1.21) Zm-p60.1 is an enzyme catalyzing the hydrolysis of transzeatin-O-glucopyranoside to glucose and trans-zeatin. This thesis is focused on the production, purification and partial characterization of the mutants SB1and SB2 of Zm-p60.1. The thesis includes a theoretical part devoted to a review of the literature on purification of recombinant proteins involved in cytokinin metabolism of plant. The practical part contains part of the study of two obtained mutant forms of Zm-p60.1. The Zm-p60.1 mutants SB1 and SB2 were expressed in Escherichia coli BL21(DE3)pLysS-T1(R) and purified by affinity chromatography on a 5 ml HisTrap HP column followed by gel filtration on a HiLoad 16/60 Superdex 200 prep grade column to purities of > 95%. Enzyme kinetics was measured at 30 degrees C with the artificial substrate pNPG: the values for the SB1 mutant were K-m = 0.48 +/- 0.02 mmol.l(-1) and k(cat) = 12.94 +/- 0.10 s(-1). For SB2 the values were K-m = 0.50 +/- 0

Druh

D - Stať ve sborníku

CEP obor

GE - Šlechtění rostlin

OECD FORD obor

—

Projekt

Výsledek vznikl pri realizaci vícero projektů. Více informací v záložce Projekty.

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Rok uplatnění

2012

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Název statě ve sborníku

MendelNet 2012: Proceedings of International Ph.D. Students Conference

ISBN

978-80-7375-836-3

ISSN

—

e-ISSN

—

Počet stran výsledku

8

Strana od-do

1210-1217

Název nakladatele

Mendelova univerzita v Brně

Místo vydání

Brno

Místo konání akce

Brno

Datum konání akce

21. 11. 2012

Typ akce podle státní příslušnosti

EUR - Evropská akce

Kód UT WoS článku

000366461200141