Stanovení plísní metodou PCR

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F26232511%3A_____%2F26%3AN0000015" target="_blank" >RIV/26232511:_____/26:N0000015 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

Stanovení plísní metodou PCR

Popis výsledku v původním jazyce

Metodika stanovuje postup pro kvalitativní detekci vybraných rodů mikroskopických hub pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR) s využitím rodově specifických primerů. Je určena pro rychlou a spolehlivou identifikaci vybraných rodů plísní z kultivovaných izolátů získaných ze stavebních materiálů, vnitřního prostředí budov, vzorků životního prostředí i dalších matric, u nichž je požadována přesná taxonomická identifikace. Metoda je založena na izolaci genomové DNA z čistých kultur mikroskopických hub a následné amplifikaci diagnostických oblastí genomu pomocí rodově specifických primerů. Pro jednotlivé rody jsou využívány primerové páry cílené na konzervované nebo diagnosticky významné oblasti genomu, zejména ITS oblast ribozomální DNA nebo vybrané funkční geny umožňující jednoznačnou identifikaci příslušného rodu. Amplifikované produkty jsou analyzovány agarózovou gelovou elektroforézou a vizualizovány fluorescenčním barvivem pro detekci nukleových kyselin. Přítomnost amplikonu o očekávané velikosti potvrzuje přítomnost DNA cílového rodu mikroskopické houby. Součástí metodiky jsou požadavky na kontrolu kvality analýzy, použití pozitivních a negativních kontrol a pravidla interpretace výsledků.

Název v anglickém jazyce

Detection of moulds using the PCR Method

Popis výsledku anglicky

This methodology establishes a procedure for the qualitative detection of selected genera of microscopic fungi using polymerase chain reaction (PCR) with genus-specific primers. It is intended for the rapid and reliable identification of selected fungal genera from cultured isolates obtained from building materials, indoor environments, environmental samples, and other matrices for which accurate taxonomic identification is required. The method is based on the isolation of genomic DNA from pure cultures of microscopic fungi and the subsequent amplification of diagnostic regions of the genome using genus-specific primers. For each genus, primer pairs are used that target conserved or diagnostically significant regions of the genome, particularly the ITS region of ribosomal DNA or selected functional genes that enable unambiguous identification of the respective genus. The amplified products are analyzed by agarose gel electrophoresis and visualized using a fluorescent dye for nucleic acid detection. The presence of an amplicon of the expected size confirms the presence of DNA from the target genus of the microscopic fungus. The methodology includes requirements for quality control of the analysis, the use of positive and negative controls, and rules for interpreting the results.

Druh

N_metA - Akreditované metodiky a postupy

CEP obor

—

OECD FORD obor

20100 - Civil engineering

Projekt

—

Návaznosti

I - Institucionalni podpora na dlouhodoby koncepcni rozvoj vyzkumne organizace

Rok uplatnění

2026

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Interní identifikační kód produktu

SOP M68

Číslo předpisu

—

Technické parametry

Metodika zavádí standardizovaný laboratorní postup pro molekulárně biologickou identifikaci vybraných rodů mikroskopických hub s využitím rodově specifických primerů. Ve srovnání s běžně používanou identifikací založenou na morfologických znacích umožňuje rychlejší, objektivnější a reprodukovatelnější určení příslušnosti izolátu k cílovému rodu a omezuje subjektivní vliv zkušenosti hodnotitele. Metodika sjednocuje postup izolace DNA, podmínky amplifikace, požadavky na kontrolu kvality a interpretaci výsledků jednotlivých PCR reakcí. Zavedený postup umožňuje rutinní využití molekulární identifikace v laboratorní praxi a představuje vhodný doplněk klasických kultivačních a mikroskopických metod.

Ekonomické parametry

Metodika umožňuje významně zkrátit dobu potřebnou pro identifikaci vybraných rodů mikroskopických hub a zvýšit spolehlivost jejich taxonomického zařazení. Molekulární přístup eliminuje řadu omezení klasické morfologické identifikace, zejména u izolátů s atypickou morfologií nebo nedostatečně vyvinutými diagnostickými znaky. Standardizace celého postupu zajišťuje reprodukovatelnost výsledků mezi jednotlivými laboratořemi a vytváří předpoklady pro rutinní využití metody při diagnostice biologického napadení stavebních materiálů i při hodnocení účinnosti biocidních přípravků.

Označení certifikačního orgánu

Český institut pro akreditaci, o.p.s.

Datum certifikace

—

Způsoby využití výsledku

A - Výsledek využívá pouze poskytovatel