POROVNÁNÍ DVOU IMUNOANALYTICKÝCH METOD PRO STANOVENÍ PROTILÁTEK PROTI VIRU KLÍŠŤOVÉ ENCEFALITIDY

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F60461373%3A22310%2F20%3A43921009" target="_blank" >RIV/60461373:22310/20:43921009 - isvavai.cz</a>

Nalezeny alternativní kódy

RIV/00216208:11310/20:10418227

Výsledek na webu

<a href="http://www.chemicke-listy.cz/ojs3/index.php/chemicke-listy/article/view/3694/3627" target="_blank" >http://www.chemicke-listy.cz/ojs3/index.php/chemicke-listy/article/view/3694/3627</a>

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

POROVNÁNÍ DVOU IMUNOANALYTICKÝCH METOD PRO STANOVENÍ PROTILÁTEK PROTI VIRU KLÍŠŤOVÉ ENCEFALITIDY

Popis výsledku v původním jazyce

Imunoanalytické metody hrají důležitou roli při detekci protilátek proti různým virovým patogenům v klinických a biologických vzorcích1–3 . Nejběžnějším dostupným analytickým a biochemickým způsobem detekce protilátek je enzymová imunoanalýza (ELISA, z angl. enzymelinked immunosorbent assay), při které se enzymy používají jako značky pro detekci cílových molekul, jež v roztoku se substrátem poskytují měřitelný signál4,5, nejčastěji spektrofotometrický. Nevýhodu použití enzymů je pokles jejich enzymatické aktivity s časem (na 70 až 50 %). Kromě toho musí být enzymy skladovány pouze při nízkých teplotách nebo v konzervačních roztocích, což vyžaduje pravidelné kontrolování jejich účinnosti a častou a rutinní validaci testovacích systémů ELISA (cit.6 ). Z výše uvedených důvodů roste v posledních desetiletích zájem o vývoj elektrochemických imunosenzorů, především vzhledem k jejich vysoké citlivosti, relativně nízkým pořizovacím a provozním nákladům a možnostem jejich miniaturizace7–11. Elektrochemické imunosenzory měří intenzitu elektrického signálu, který přímo či nepřímo poskytují produkty interakcí mezi protilátkou a antigenem, a tím kombinují specificitu imunochemické reakce s výhodami elektrochemické detekce. V závislosti na zvolené detekční technice se pak měří elektrická vodivost, elektrický proud, elektrodový potenciál, elektrická kapacita nebo elektrická impedance12,13 . Nejčastěji využívané elektrochemické imunosenzory jsou založeny na kovových nanočásticích (např. zlatých, stříbrných, měděných) použitých jako značky pro elektrochemickou detekci cílových biomolekul14–16 . Ve většině publikací zaměřených na elektrochemickou detekci biomolekul byly použity stříbrné nanočástice (AgNP, z angl. silver nanoparticle)15–17 vzhledem k celé řadě výhod, od snadné přípravy přes dobře prostudované vlastnosti až po znalost jejich chování při těchto stanoveních. Proto i v našem případě byly vybrány AgNP právě vzhledem k jejich relativně jednoduché přípravě a jasně definovanému voltametrickému signálu poskytovanému ionty stříbra uvolněnými z AgNP. Tato práce je zaměřena na stanovení protilátek proti viru klíšťové encefalitidy (KE), který je původcem lidské virové infekce centrálního nervového systému (CNS) v endemických oblastech Evropy a Asie18. Nejčastěji se tato nemoc projevuje horečkou, bolestí hlavy a záchvaty. Dalšími projevy mohou být fokální neurologický deficit a kóma19. Je proto nutné onemocnění diagnostikovat co nejdříve, aby se včas zahájila léčba. Infekce virem KE způsobuje imunitní reakci buněk lidského těla, a v důsledku toho začíná produkce protilátek proti KE20, což lze využít ke včasné diagnóze tohoto onemocnění. Cílem této práce bylo testování a porovnání dvou imunoanalytických metod – enzymové imunoanalýzy (ELISA) a voltametrické imunoanalýzy – pro detekci protilátek proti viru KE v modelových vodných prostředích a aplikace získaných poznatků na stanovení protilátek proti viru KE v lidském krevním séru.

Název v anglickém jazyce

Comparison of Two Immunoanalytical Methods for Determination of Antibodies to Tick-Borne Encephalitis Virus

Popis výsledku anglicky

A highly effective way to improve the prognosis of viral infectious diseases is early detection of antibodies to various viral pathogens in biological fluids. Among a wide range of viral pathogens, tick-borne encephalitis virus (TBEV) attracts a special attention. This work reports a comparison between two bioanalytical methods (enzyme‑linked immunosorbent assay (ELISA) and voltammetric immunoassay) to determine antibodies to TBEV in a human blood serum. In these assays, the detected molecule binds to the conjugate which is labelled with enzyme (in ELISA) or silver nanoparticles (in voltammetric immunoassay). In the ELISA, the signal corresponding to a colourproducing substrate (3,3ʹ,5,5ʹ-tetramethylbenzidine) through an enzymatic reaction is detected using a spectrophotometer at a wavelength of 450 nm. In the electrochemical immunoassay, the signal is read by the linear sweep anodic stripping voltammetry (LSASV) of silver ions (through the electrochemical stripping of accumulated elemental silver) on a graphite composite electrode. The results of both measurements demonstrated that signals increased with the increasing concentration of the target antibodies to TBEV within the range from 100 to 1600 IU mL–1 . Detection limits for ELISA and voltammetric assay were 30 and 90 IU mL–1 , respectively. The practical application of both immunoanalytical approaches has been verified by determining the amount of antibodies to TBEV in the human blood serum. The obtained results clearly showed an excellent agreement between the detected concentration values of antibodies to TBEV obtained by the electrochemical method and by the standard ELISA method.

Druh

J_imp - Článek v periodiku v databázi Web of Science

CEP obor

—

OECD FORD obor

10406 - Analytical chemistry

Projekt

<a href="/cs/project/GC20-01417J" target="_blank" >GC20-01417J: Nové přístupy zabraňující pasivaci elektrod při monitorování environmentálních organických polutantů</a><br>

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Rok uplatnění

2020

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Název periodika

Chemické listy

ISSN

0009-2770

e-ISSN

—

Svazek periodika

114

Číslo periodika v rámci svazku

9

Stát vydavatele periodika

CZ - Česká republika

Počet stran výsledku

5

Strana od-do

618-622

Kód UT WoS článku

000567994200009

EID výsledku v databázi Scopus

2-s2.0-85090773664