Vyhledání optimálního ředidla pro mrazení epididymálních spermií hřebců

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F62157124%3A16170%2F21%3A43879271" target="_blank" >RIV/62157124:16170/21:43879271 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

<a href="https://www.vfu.cz/files/upload/693/Sbornik_IGA_2021.pdf" target="_blank" >https://www.vfu.cz/files/upload/693/Sbornik_IGA_2021.pdf</a>

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

Vyhledání optimálního ředidla pro mrazení epididymálních spermií hřebců

Popis výsledku v původním jazyce

Kryokonzervace epididymálních spermií je metoda, která umožňuje záchranu genetického materiálu cenných zvířat při krizových situacích, a protože se jedná právě o finální kolekci spermií, je důležité používat optimální protokol pro jejich zpracování a mrazení. Úspěch kryokonzervace hřebčích epididymálních spermií závisí na teplotě skladování biologického materiálu, rychlosti ochlazování, hygienické kontrole a chemickém složení ředidla. Hlavním cílem projektu bylo ověřit teorii, že motilita epididymálních spermií po rozmrazení je rozdílná v závislosti na použitém ředidle a vyhledat optimální kryokonzervační ředidlo, v závislosti na posouzení dat z měření parametrů celkové a progresivní motility po rozmrazení pomocí CASA systému. Autoři vycházeli z dat předchozí studie podporované interní grantovou agenturou IGA 115/2020/FVL, ze které vyplynula ideální koncentrace spermií 1000 x 10ˇ6 v ml, s přídavkem glycerolu 4%, ale ani u této nejlepší kombinace nebyla motilita spermií po rozmrazení uspokojivá. Spermie byly mrazeny pouze v jednom typu ředidla (Gent) a bylo by tedy vhodné pokusit se najít vhodnější ředidlo právě pro mrazení epididymálních spermií. V projektu byly použity epididymální spermie získané retrográdním výplachem ocasu nadvarlete a ductus deferens z nadvarlat hřebců kastrovaných na KCHK i v terénních podmínkách. Po výplachu byla orientačně posouzena jejich motilita pomocí světelného mikroskopu a pomocí CASA systému. Vzorky byly následně zcentrifugovány, supernatant odsát a spermie resuspendovány v 4 běžně dostupných a nejčastěji používaných ředidlech pro koňské spermie (INRA 96, Gent, francouzské ředidlo a BotuSemen GOLD), s koncentrací spermií 1000 x 10ˇ6 v ml, které jsme doplnili na námi zjištěnou nejlepší koncentraci glycerolu 4 %. Jejich motilita byla posouzena pomocí CASA systému. Vzorky byly rozplněny do pejet a zamrazeny běžným postupem KCHK. Nejdříve po 5 dnech byly rozmrazeny a pomocí CASA systému byla posuzována motilita ihned po rozmrazení, a inkubaci ve vodní lázni po 60, 120 a 180 min. Nejlepší motility vykazovaly vzorky naředěné ředidlem INRA 96, u těchto vzorků byla i po 180 min inkubace zaznamenána téměř 30% motilita, což je motilita dostatečná k praktickému využití.

Název v anglickém jazyce

Finding the optimal diluent for freezing stallion epididymal sperm

Popis výsledku anglicky

Cryopreservation of epididymal spermatozoa is a method that enables the rescue of the genetic material of valuable animals in crisis situations, and since this is the final collection of spermatozoa, it is important to use an optimal protocol for their processing and freezing. The success of cryopreservation of stallion epididymal sperm depends on the storage temperature of the biological material, the cooling rate, hygienic control, and the chemical composition of the diluent. The main goal of the project was to verify the theory that the motility of epididymal sperm after thawing is different depending on the diluent used and to find the optimal cryopreservation diluent, depending on the assessment of data from measuring parameters of total and progressive motility after thawing using CASA system. The authors relied on data from a previous study supported by the internal grant agency IGA 115/2020/FVL, which showed an ideal sperm concentration of 1000 x 10ˇ6 in ml, with the addition of 4% glycerol, but even with this best combination, sperm motility after thawing was unsatisfactory. Sperm were frozen in only one type of diluent (Gent) and it would be appropriate to try to find a more suitable diluent for freezing epididymal sperm. This project used epididymal sperm obtained by the retrograde flush of the epididymis tail and ductus deferens from the epididymis of stallions castrated at KCHK and in field conditions. After the flush, their motility was assessed by light microscopy and the CASA system. The samples were subsequently centrifuged, the supernatant aspirated and the sperm resuspended in 4 commonly available and most frequently used diluents for equine sperm (INRA 96, Gent, French diluent, and BotuSemen GOLD), with a sperm concentration of 1000 x 10ˇ6 in ml, and glycerol concentration of 4%. Their motility was assessed using the CASA system. The samples were filled into straws and frozen according to the standard KCHK procedure. They were thawed after 5 days at the earliest and the motility was assessed immediately after thawing and incubated in a water bath for 60, 120, and 180 minutes using the CASA system. Samples diluted with INRA 96 diluent showed the best motility, almost 30% motility was recorded in these samples even after 180 min incubation, which is sufficient motility for practical use.

Druh

D - Stať ve sborníku

CEP obor

—

OECD FORD obor

40301 - Veterinary science

Projekt

—

Návaznosti

S - Specificky vyzkum na vysokych skolach<br>I - Institucionalni podpora na dlouhodoby koncepcni rozvoj vyzkumne organizace

Rok uplatnění

2021

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Název statě ve sborníku

Sborník příspěvků z výsledků řešení projektů IGA VETUNI 2021

ISBN

978-80-7305-865-4

ISSN

—

e-ISSN

—

Počet stran výsledku

4

Strana od-do

60-63

Název nakladatele

Veterinární univerzita Brno

Místo vydání

Brno

Místo konání akce

Brno

Datum konání akce

14. 12. 2021

Typ akce podle státní příslušnosti

EUR - Evropská akce

Kód UT WoS článku

—