Optimalizace metody pro detekci virových částic v mase a masných výrobcích

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00027162%3A_____%2F19%3AN0000278" target="_blank" >RIV/00027162:_____/19:N0000278 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

Optimalizace metody pro detekci virových částic v mase a masných výrobcích

Popis výsledku v původním jazyce

XXIII. Celostátní konference virologů – Hradecké virologické dny, 22. – 23.10. 2019, přednáška. Mezi nejvýznamnější virové patogeny přenášené potravinami se řadí zejména virus hepatitidy A a noroviry. Tato agens jsou odpovědná za vznik četných epidemií s významným dopadem na zdraví obyvatelstva, přičemž jako vehikulum může sloužit jakákoli potravina rostlinného i živočišného původu. Kvůli omezení jejich šíření a propuknutí epidemií spojených s kontaminovanými potravinami je nutná včasná a spolehlivá detekce těchto agens. Jejím nezbytným předpokladem je dostatečně efektivní izolace virových částic, nebo přímo virových nukleových kyselin z dané potraviny. Pro některé matrice, např. drobné ovoce, zelenina, mořské plody a pitná voda jsou tyto metody již standardizovány (ISO 15216-1). Pro maso a lahůdkové masné výrobky standardizace zatím neexistuje. Proto cílem současných studií je vývoj a optimalizace metod pro izolaci virových částic nebo virových nukleových kyselin z masa a masných výrobků. K tomuto účelu byly vybrané vzorky masa a masných výrobků uměle kontaminovány částicemi in vitro připraveného bakteriofága MS2. Následně byly provedeny tři typy oplachů alkalickými elučními roztoky pro získání virových částic a dva typy oplachu lyzačními roztoky pro přímou izolaci nukleových kyselin (TRIreagent®). Obsah cílových virových nukleových kyselin byl kvantifikován RT-qPCR. Po srovnání výtěžnosti uvedených postupů byla stanovena metoda, která pro většinu uvedených matric poskytovala nejvyšší účinnost a robustnost. Srovnáním metod oplachu v alkalickém prostředí a oplachu pomocí TRIreagent® bylo pozorováno, že alkalická eluce je mnohem méně účinná ve srovnání s přímou izolaci nukleových kyselin. Z toho důvodu byly následně porovnány metody pro přímou izolaci nukleových kyselin – koncentrovaný TRIreagent® a směs TRIreagent®+PBS. Dle získaných výsledků přímá izolace nukleových kyselin z matrice se jeví jako nejvhodnější metoda izolace pro matrice masa a masných výrobků. TRIreagent® s PBS poskytuje řádově srovnatelné výsledky ve srovnání s koncentrovaným roztokem TRIreagent®. Tento postup poskytne vhodné řešení problematické analýzy potravin živočišného původu.

Název v anglickém jazyce

The optimization of the method for the detection of viral particles in meat and meat products

Popis výsledku anglicky

XXIII. National Conference of Virologists - Hradec Virological Days, 22. - 23.10. 2019, oral presentation. Hepatitis A virus and Norovirus belong among most important foodborne viral pathogens. They are responsible for the numerous outbreaks with a significant impact on the health of the population. For the reducing/avoiding of the outbreaks associated with contaminated food, a timely and reliable detection of these viruses is necessary. For some matrices, e.g. small fruit, vegetables, bivalve mollusks and bottled water, standardized methods are available (ISO 15216-1). However, for meat and meat products, the standardization does not exist. Therefore, the aim of this research is the development and the optimization of the method for isolating viral particles or viral nucleic acids from meat and meat products. Samples of meat and meat products were spiked with pseudovirion particles. Subsequently, five different isolation methods for obtaining viral particles or viral nucleic acids, were performed. The amount of target nucleic acids has been quantified using RT-qPCR. The recovery of each used method has been calculated. After comparing of recovery values, the method with highest efficacy and robustness for the majority of matrices has been determined. The alkaline elution is much less effective than direct isolation of nucleic acids. Comparing two procedures for the direct isolation of nucleic acids, concentrated TRIreagent® versus TRIreagent® +PBS , the most suitable methods for the matrices of meat and meat products is the combination of TRIreagent® and PBS. Recovery values for the combination of TRIreagent® and PBS are comparable to that of concentrated TRIreagent® solution. Used method will provide an appropriate solution to the problematic analysis of the food of animal origin.

Druh

O - Ostatní výsledky

CEP obor

—

OECD FORD obor

10607 - Virology

Projekt

Výsledek vznikl pri realizaci vícero projektů. Více informací v záložce Projekty.

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Rok uplatnění

2019

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů